Que nos explique a todos el perfecto mentir oso cómo es posible que en 2008 ya se nombrase la existencia del SARS-COV-2 (Y LA FUTURA SARS-COV-3)
Ah ya sé, hará honor a su apodo de Señor Fake News y dirá que eso son, Fake News!
Vacunafóbicos, Asesinos potenciales
- Autor OSO
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Que nos explique a todos el perfecto mentir oso cómo es posible que en 2008 ya se nombrase la existencia del SARS-COV-2 (Y LA FUTURA SARS-COV-3)
Ah ya sé, hará honor a su apodo de Señor Fake News y dirá que eso son, Fake News!
Como podrán comprobar en esta pagina del gobierno británico, se hace mención, así lo titulan, al “Resumen de modelos adicionales de flexibilización de restricciones – Hoja de ruta paso 2, 31 de marzo de 2021“. Si hacen clic en el PDF que se muestra a continuación llamado de la misma forma, SPI-MO: Resumen de modelos adicionales de flexibilización de restricciones – Hoja de ruta paso 2, 31 de marzo de 2021, y se dirigen, por ejemplo, a la página 10 del mismo en su punto número 32 se encontrarán con el siguiente texto, que no necesita ningún comentario puesto que lo que se reconoce en él es gravísimo:
Esto se analiza con más detalle en los párrafos 55 y 56.
Si nos dirigimos a uno de esos párrafos a los que hace mención, el 56, nos encontraremos con que se dice lo siguiente:
Si nos dirigimos a uno de esos párrafos a los que hace mención, el 56, nos encontraremos con que se dice lo siguiente:
¿Qué quieren que les digamos después de leer cosas como estas, que nosotros no nos vacunaríamos? Pues ciertamente así es, nosotros no nos vacunaríamos.
PDF Gobieno del Reino Unido
Última edición:
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Salud y bendición en la paz de Cristo.
Pongo una TRADUCCIÓN del PDF que APORTASTE COMO PRUEBA... SI TE ANIMAS puedes REVISARLA y EDITARLA... para que SE ENTIENDA MEJOR... yo ESTOY ALGO CANSADO y VOY a CENAR ALGO.
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J OURNAL OF C LINICAL M ICROBIOLOGY , mayo de 2008, p. 1734-1740Vol. 46, No. 50095-1137 / 08 / $ 08.000 doi: 10.1128 / JCM.02248-07Copyright © 2008, Sociedad Estadounidense de Microbiología. Reservados todos los derechos. Partículas similares a virus resistentes a la ARNasa que contienen ARN quimérico largoSecuencias producidas por el sistema de coexpresión de dos plásmidos Yuxiang Wei, 1,2 † Changmei Yang, 1,2 † Baojun Wei, 1,2 Jie Huang, 1,2 Lunan Wang, 2 Shuang Meng, 2Rui Zhang, 2 y Jinming Li 1,2 * Escuela de Graduados, Facultad de Medicina de la Unión de Pekín, Academia China de Ciencias Médicas, Beijing, República Popular de China, 1 yDepartamento de Inmunoensayo y Diagnóstico Molecular, Centro Nacional de Laboratorio Clínico, Hospital de Beijing, Beijing,República Popular China 2 Recibido el 20 de noviembre de 2007 / Devuelto para su modificación el 28 de diciembre de 2007 / Aceptado el 16 de febrero de 2008 Las partículas similares a virus no infecciosas resistentes a la ARNasa que contienen secuencias de ARN exógenas (ARN blindado) sonbuenos candidatos como controles de ARN y estándares en la detección de virus de ARN. Sin embargo, la longitud del ARN empaquetadoen las partículas similares a virus con alta eficacia suele ser inferior a 500 bases. En este estudio, describimos un métodopara producir L-RNA blindado. El L-ARN blindado es un complejo de ARN y proteína de la cubierta del bacteriófago MS2producido en Escherichia coli por la inducción de un sistema de coexpresión de dos plásmidos en el que la proteína de la cubiertay maturasas se expresan a partir de un plásmido y la secuencia de ARN diana con el tallo-bucle de MS2 modificado (pacsite) se transcribe a partir de otro plásmido. Un L-RNA blindado de 3V de 2248 bases que contiene seis fragmentos de genes:virus de la hepatitis C, coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV1, SARS-CoV2 y SARS-CoV3),el gen de la matriz del virus de la influenza aviar (M300) y el virus de la influenza aviar H5N1 (HA300) —fue ex-presionado por el sistema de coexpresión de dos plásmidos y se demostró que tiene todas las características deARN blindado. Evaluamos el L-RNA blindado de 3V como calibrador para múltiples ensayos de virus. Usamos elEstándar internacional de la OMS para el ARN del VHC (NIBSC 96/790) para calibrar el L-ARN blindado quimérico, quese diluyó mediante diluciones seriadas de 10 veces para obtener muestras que contenían 10 6 a 10 2 copias. En conclusión, elEl enfoque que utilizamos para la preparación de L-RNA blindado es práctico y podría reducir la mano de obra y el costo de la calidad.control en ensayos de virus de ARN multiplex. Además, podemos asignar el ARN blindado quimérico con ununidad internacional de detección cuantitativa.El ARN blindado es un complejo de capa de bacteriófago MS2proteína y ARN producidos en Escherichia coli por inducciónde un plásmido de expresión que codifica la secuencia de bacteriófagossecuencia que consiste en la maturasa, la proteina de la cubierta, el pacsitio y una secuencia de ARN exógena. Este método producepartículas similares a virus recombinantes que no son infecciosas ycontienen ARN predefinido (2–6, 8, 11, 12, 15, 16, 28). EstasLos ARN blindados son resistentes a la ARNasa en virtud de su encapsuladosulación dentro de una proteína de cubierta MS2, y han sido ampliamenteutilizados como controles, estándares o calibradores para la detección devirus de la hepatitis C (VHC) (11, 12, 28), inmunodeficiencia humanavirus de la ciencia (11, 15), síndrome respiratorio agudo severo coro-navirus (SARS-CoV) (3, 11), enterovirus (2, 5), influenza aviarvirus 5 (4) y virus del Nilo Occidental (6) mediante transcripción inversaPCR (RT-PCR), RT-PCR en tiempo real y ADN ramificado comodice (2–6, 11, 12, 15, 28).El bacteriófago MS2 consta de 180 U del bacteriófagoproteína de la cubierta que encapsula el genoma del bacteriófago (25).El genoma del ARN del fago MS2 comprende un solo sentido positivohebra que codifica 3.569 nucleótidos. Los genes están organizados a partir deel 5 final de la siguiente manera: la maturasa o proteína A, la bacterio-proteína de la cubierta del fago, una proteína de lisis de 75 aminoácidos y una replicasasubunidad. El empaquetamiento del genoma del ARN por la proteína de la cubierta se iniciadebido a la unión de alta especificidad a un sitio único en el ARN, unestructura de tallo-bucle único, que contiene el codón de iniciación delgen de la replicasa viral. El ARN blindado contiene aprox.aproximadamente 1,7 kb de secuencia de ARN de bacteriófago que codifica lamaturasa, la proteína de la cubierta y el sitio pac. La MS2 de tipo salvajeEl bacteriófago contiene un genoma de ARN de aproximadamente 3,6 kb.Además, la naturaleza extensivamente plegada del ARN de MS2 (22) puedelo hacen particularmente adecuado para la absorción en los confines de un pequeñocápside. Por lo tanto, teóricamente, como máximo, 1.9 kb de no bacteriófagosLa secuencia de ARN podría encapsularse mediante este método. Prácticamente,Se ha demostrado que el envasado de 500 bases de ARN esmuy eficiente; sin embargo, el envasado de cantidades de 1 y 1,5 kb deEl ARN es ineficiente (15). Recientemente, Huang et al. (11) usado blindadoTecnología de ARN para empaquetar un ARN extraño de 1200 nucleótidossecuencia eliminando algunas secuencias desechables entre lassitio de clonación múltiple y el terminador de la transcripción; sin embargo, parafecha, no ha habido informes de ARN blindado con tamañosmayor de 1200 pb.Aunque la mayoría de los ensayos de RT-PCR no se dirigen a secuencias de ARNsecuencias de más de 500 bases, hay algunas ventajas sise empaquetan secuencias de ARN diana más largas. Por ejemplo, elensayo Quantiplex del virus de la inmunodeficiencia humana (ChironCorp.) utiliza un estándar de aproximadamente 3 kb de longitud;consecuentemente, no es posible producir un solo blindadoEstándar de ARN para este ensayo utilizando tecnología rutinaria de ARN blindado.nología. Otra ventaja de utilizar ARN blindado de varioskilobases es que los cebadores de PCR para diferentes regiones de estoslos genes pueden usarse con un solo estándar de ARN blindado. C.A-En consecuencia, no es necesario construir un blindado diferente * Autor correspondiente. Dirección postal: Departamento de Inmuno-ensayo y diagnóstico molecular, Centro Nacional de Laboratorios Clínicostory, 1 Dahua Road, Dongdan, Beijing 100730, República Popular dePorcelana. Teléfono: 86-10-58115053. Envíe por fax: 86-10-65212064. Correo electrónico: ljm63hn@ yahoo.com.cn.† YW y CY contribuyeron igualmente a este estudio.Publicado antes de impresión el 27 de febrero de 2008.1734 Descargado de https://journals.asm.org/journal/jcm el 21 de julio de 2021 en 2001: 67c: 2660: 425: 21b: 21ff: fead: a6c8.
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Estándar de ARN para cada par de cebadores de PCR que se pueda utilizar.Con tal estándar, diferentes grupos de investigación y clínicalos laboratorios podrían comparar directamente sus datos cuantitativos. EnAdemás, si se empaquetaran secuencias largas de ARN,podría producir un único estándar de ARN blindado quimérico ycontrol que podría satisfacer las necesidades de una variedad de diferentes virusEnsayos diseñados para detectar diferentes genomas virales. Esto sería enA su vez, simplifique y reduzca el costo de la detección de virus múltiples. Piel-Además, si las secuencias de ARN blindado quimérico de diferentesLos virus de ARN contienen una región no traducida del VHC 5 (5UTR),fácilmente podríamos asignar el ARN blindado quimérico con ununidad internacional de detección cuantitativa desde unaestándar nacional para el ARN del VHC está disponible en el NationalInstituto de Estándares y Controles Biológicos (NIBSC)(20, 21).En este artículo, describimos un método para empaquetar una larga(2,000 bp) Secuencia de ARN, que se conoce como blindadaTecnología L-RNA. Intentamos determinar si el bac-secuencias de teriófagos que codifican la madurasa y el pro-teína podría reemplazarse con secuencias de ARN no bacteriófagos,permitiendo así que las secuencias de ARN de fragmentos largos se empaquetenEnvejecido. Para lograrlo, aprovechamos dossistema de coexpresión de plásmido en el que la madurasa y la capaLa proteína se expresó a partir de un plásmido [pET-28 (b)] y elARN diana que contiene un tallo-bucle modificado (sitio pac) de MS2fue producido por un segundo plásmido (pACYCDuet-1). El pacEl sitio estaba ubicado en el medio de la secuencia objetivo. En elEn el presente estudio, utilizamos una variante C-5 del tallo-bucle de tipo salvajeen el que la uridina había sido sustituida por citosina. El reemplazomento de la uridina de tipo salvaje con una citosina en la posición5aumenta significativamente la afinidad del ARN por el pelajedímero de proteína (9, 19, 27, 29). El aumento de afinidad ha sidoestimado en 6 veces (26) o incluso tan alto como 50 veces (13). Launión más fuerte de la variante C-5 en comparación con el tipo salvajeSe ha sugerido que la secuencia se debe a una interacción enimplicando la donación de un hidrógeno por el grupo amino delcitosina o el grupo hidroxilo correspondiente del enol uracilotautamer (24). MATERIALES Y MÉTODOSConstrucción de pET-MC. Se amplificaron los genes de la proteina de la cubierta y la maturasa de MS2.Fied mediante el uso de cebadores S-MC y A-MC (Tabla 1) del plásmido pMS 27 (amablementeproporcionado por DS Peabody) que contiene nucleótidos (nt) 81 a 1749 de la MS2gen del bacteriófago (nº de acceso de GenBank V00642). Cebadores de sentido e inversocontenían sitios de restricción BamHI y HindIII (subrayados), respectivamente. Estaslos cebadores corresponden a los nt 81 a 101 y nt 1721 a 1741 del genoma del fago MS2secuencia. Los fragmentos de ADN amplificados por PCR de 1,7 kb se purificaron en gel, se digirieroncon BamHI y HindIII, y luego se liga a un pET28b linealizado (Novagen)vector para generar el plásmido recombinante pET-MC. Este plásmido fue trans-formada en células competentes de E. coli DH5 de acuerdo con el fabricanteinstrucciones. Los plásmidos pET-MC en clones positivos que podrían replicarse en LBagar en presencia de 100 g de kanamicina ml 1 se aislaron utilizando unKit de purificación de plásmidos Takara MiniBEST (TaKaRa). El inserto de ADN fuesecuenciado con cebadores específicos de vector utilizando un ADN fluorescente automatizadosecuenciador (modelo 3730XL; Applied Biosystems). Las secuencias resultantes fueronidentificado mediante una búsqueda en las bases de datos del NCBI para secuencias homólogas utilizandoEXPLOSIÓN.Construcción de pACYC-3V. Una secuencia quimérica exógena de 2248 pb enLa longitud que comprende las siguientes secuencias se insertó en un pACYCDuet-1plásmido (origen de replicación de tipo p15A; Novagen): M-300 (nt 17373, 357 pbdel gen de la matriz del virus de la influenza aviar; No de acceso a GenBank. DQ864720),SARS-CoV1 (nt 15224 a 15618, 395 pb de SARS-CoV; adhesión a GenBankNo. AY864806), SARS-CoV2 (nt 18038 a 18340, 303 pb de SARS-CoV;No de acceso a GenBank. AY864806), SARS-CoV3 (nt 328110 a 28692, 583 pbde SARS-CoV; No de acceso a GenBank. AY864806), un sitio pac (19 pb), HCV(nt 18 a 310, 293 pb de HCV 5UTR; número de acceso de GenBank AF139594), yHA300 (nt 295 a 611, 317 pb del virus de la influenza aviar H5N1; GenBankno de adhesión DQ864720). La secuencia objetivo incluyó el avance y retrocesositios de cebadores, regiones ffanking y sitios de unión de sondas previamente publicados odescrito. Se colocó un sitio pac de 19 meros entre el SARS-CoV3 y el VHC (Fig. 1).Empalmamos las seis secuencias de ADN diana utilizando extensiones superpuestas (10).Durante la primera ronda de PCR, estos seis pequeños fragmentos se amplificaron de la siguiente manera:mínimos. El SARS-CoV1 se amplificó a partir de un plásmido pBSSR-V6 (proporcionado amablemente porla Academia China de Ciencias Médicas y la Facultad de Medicina de la Unión de Pekín,Instituto de Ciencias Médicas Básicas), que contiene los nt 13785 a 16051 del SARS-Gen CoV, utilizando los cebadores S-SARS1 y LAP-SARS1. El SARS-CoV2 fueamplificado a partir de un plásmido pNCCL-SARS (construido por nuestro laboratorio),que contienen nt 18038 a 18340 del gen SARS-CoV, utilizando los cebadores LAP-SARS2y A-SARS2. El SARS-CoV3 se amplificó a partir de un plásmido pBSSR7-8 (amablementeproporcionada por la Academia China de Ciencias Médicas y la Unión de Medicina de Pekínical College, Instituto de Ciencias Médicas Básicas), que contiene los nt 27730 a 29212del gen SARS-CoV, utilizando los cebadores LAP-SARS3 y A-SARS3. LaEl fragmento de VHC se amplificó a partir de un plásmido pNCCL-VHC (construido por nuestrolaboratorio), que contiene nt 18 a 310 del gen del VHC, utilizando los cebadores S-VHCy HCV-LAP1 (subrayado para el sitio pac 19mer). HA300 se amplificó a partir de un TABLA 1. Cebadores utilizados para la amplificación por PCR CebadornombreSecuencia de cebadores (5 a 3) a S-MC ...................................... CGGGATCCTGGCTATCGCTGTAGGTAGCCA-MC ..................................... CCCAAGCTTATGGCCGGCGTCTATTAGTAGS-SARS1 ................................ TATCCAAAATGTGACAGAGCCATGLAP-SARS1 .......................... ACGCTGAGGTGTGTAGGTGCAGGTAAGCGTAAAACTCATCCACA-SARS2 ............................... TAACCAGTCGGTACAGCTACTAAGLAP-SARS2 .......................... AGTTTTACGCTTACCTGCACCTACACACCTCAGCGTTGATATAAAGA-SARS3 ............................... ACTACGTGATGAGGAGCGAGAAGAGLAP-SARS3 .......................... AGCTGTACCGACTGGTTAACAAATTAAAATGTCTGATAATGGACCCCLAP-SARS2 ........................ ATCAGACATTTTAATTTGTTAACCAGTCGGTACAGCTACTAAGS-HCV ................................... ACATGAGGATCACCCATGT GGCGACACTCCACCATAGATCACTCHCV-LAP1 ............................ ATGTAAGACCATTCCGGCTCGCAAGCACCCTATCAGGCAGTACA-HA300 ............................... GAATCCGTCTTCCATCTTTCCCCCACAGTACCAAAAGATCTTCHA300LAP ............................ CTGATAGGGTGCTTGCGAGCCGGAATGGTCTTACATAGTGGAGMSLAP1 ............................. ATGGCTCTGTCACATTTTGGATAGAGTAGCTGAGTGCGACCTCCTTAGMSLAP2 ............................. AAGGAGGTCGCACTCAGCTACTCTATCCAAAATGTGACAGAGCCATGFIVELAP1 ............................ CATGGGTGATCCTCATGTACTACGTGATGAGGAGCGAGAAGAGFIVELAP2 ............................ CGCTCCTCATCACGTAGTACATGAGGATCACCCATGTGGCSuperposiciónA .............................. CCTTAATTAA CCCACAGTACCAAAAGATCTTCTTGM300-S ................................. TTGGCCGGCC GAGTCTTCTAACCGAGGTCGAAACGsuperposición-A ............................... CCCACAGTACCAAAAGATCTTCTTGM300RT-S ............................. GGATTTGTATTCACGCTCACCHA300RT-A .......................... TGGGGATGATCTGAATTTTCTC a Los sitios de restricción BamHI, HindIII, FseI y PacI se indican mediante subrayado En g; a C vairiant se indica en negrita. V OL . 46 de 2008ARN QUIMÉRICO LARGO ARMADO L-ARN1735 Descargado de https://journals.asm.org/journal/jcm el 21 de julio de 2021 en 2001: 67c: 2660: 425: 21b: 21ff: fead: a6c8.
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Plásmido pNCCL-H5N1 (construido por nuestro laboratorio) utilizando los cebadoresHA300LAP y A-HA300. M300 se amplificó a partir de un plásmido pNCCL-H5N1(construido por nuestro laboratorio) utilizando los cebadores M300-S y MSLAP1. LaLos productos de PCR de la primera ronda de amplificaciones se purificaron en gel y se usaron,junto con cebadores externos, en la extensión de superposición PCR. En el segundo-PCR redonda, SARS-CoV1 amplificado más SARS-CoV2 y HCV más HA300 fueronamplificado utilizando los pares de cebadores S-SARS1 – LAP-SARS2 y FIVELAP2-Over-lapA, respectivamente. Los productos de PCR de la segunda ronda se purificaron en gel. LaSARS-CoV1 amplificado por PCR de tercera ronda más SARS-CoV2 más SARS-CoV3 usandolos cebadores MSLAP2 y FIVELAP1. Los productos de PCR de la tercera rondase purificaron en gel. El SARS-CoV1 amplificado por PCR de cuarta ronda más el SARS-CoV2más SARS-CoV3 más HCV más HA300 utilizando los cebadores MSLAP2 y OverlapA.El M300 amplificado por PCR de quinta ronda más el SARS-CoV1 más el SARS-CoV2 másSARS-CoV3 más HCV más HA300 utilizando los cebadores M300-S y OverlapA.Los cebadores de sentido e inverso contenían sitios de restricción FseI y PacI (subrayados enTabla 1), respectivamente. Los productos de la PCR de la quinta ronda se purificaron en gel. El purificadoLos fragmentos se clonaron en un vector pGEM-T Easy (Promega) y luego se escindierondel plásmido recombinante resultante con las enzimas de restricción FseI y PacI.Simultáneamente, el plásmido pACYCDuet-1 se digirió con FseI y PacI, ylos fragmentos resultantes se ligaron en el plásmido pACYCDuet-1 linealizado paraproducir un nuevo plásmido donante (pACYC-3V). plásmidos pACYC-3V en positivoclones, que podrían replicarse en agar LB en presencia de 100 g de cloranfen-icol ml 1 , se confirmaron mediante PCR y secuenciación.Construcción de pET-MS2-3V. Para comparar partículas de ARN blindadasy partículas L-RNA blindadas, construimos pET-MS2-3V de acuerdo con latecnología de ARN blindado de dientes (15). Los ADN que codifican la madurasa; el abrigoproteína; el sitio pac; y la secuencia quimérica exógena (1900 pb) que contieneSARS-CoV1, SARS-CoV2, SARS-CoV3, HCV y HA300 fueron clonadoscorriente del promotor inducible T7 de pET28b.Expresión y purificación de partículas similares a virus. Tanto pET-MC comoLos plásmidos pACYC-3V se cotransformaron en la cepa de E. coli BL21 (DE3). El 3VEl L-ARN blindado se expresó como se describió anteriormente (16). Las celdas fueroncosechado por centrifugación y luego lavado tres veces con fosfato-buff-solución salina. Las células se sedimentaron y luego se resuspendieron en 20 ml de tratamiento con ultrasonidos.tampón (5 mM MgSO 4 , 0,1 M NaCl, 50 mM Tris [pH 8,0]). Las celdas fueronsonicado (Branson Sonifier 350) mediante el uso de una pequeña sonda de sonicación que opera enCiclo de trabajo del 50% (unidad 5 de potencia) durante cinco pulsos. El sonicado se colocó en hielo durante1 min, y luego se repitió el paso de sonicación otras cinco veces. El sonicadose centrifugó para sedimentar los restos celulares. Un total de 20 ml de sobrenadanteluego se incubó con 1,000 U de E. coli RNase 1 y 200 U de bovinoADNasa 1 pancreática a 37 ° C durante 40 min con el fin de eliminar el ARN de E. coli yADN. Después del tratamiento con nucleasa, se sometieron a electroforesis 5 l de sobrenadante en ungel de agarosa en tampón TAE y teñido con bromuro de etidio para analizarL-RNA blindado. Luego se realizó un gradiente de CsCl como método estándar(dieciséis). Para comparar las densidades de L-RNA blindado de 3V y blindado de 3VPartículas de ARN, el ARN blindado 3V de pET-MS2-3V se expresó comodescrito anteriormente (16). Cada ARN se cargó en gradientes separados. Despuésultracentrifugación, el tubo de ultracentrifugación se estabilizó en posición verticalposición. Se insertó lentamente una aguja de calibre 18 en la parte inferior del tubo, ySe recogieron y pesaron fracciones de 0,5 ml para determinar la densidad deel CsCl. La densidad óptica de cada fracción a 260 nm se midió en ordenpara cuantificar las partículas de L-RNA blindado de 3V y de ARN blindado de 3V. A 5-lPorción de cada fracción se sometió a electroforesis en un gel de agarosa en tampón TAEy teñido con bromuro de etidio para determinar las fracciones que contienening L-RNA blindado y aquellos que contienen RNA blindado. Las fracciones fueronluego se agruparon y dializaron frente a tampón de sonicación para eliminar el CsCl. LaEl dializado se recogió y se almacenó a 4 ° C.Extracción de ARN. Se extrajo ARN de 140 l de los blindados purificados.L-RNA mediante el uso de un minikit de RNA viral QIAamp (Qiagen) de acuerdo con elinstrucciones del fabricante. El ARN extraído se eluyó en 60l de dietilH 2 O tratado con pirocarbonato y luego se usa como plantilla para RT-PCR y ARNelectroforesis.Identificación de L-RNA blindado por RT-PCR. RT del L-RNA blindado de 3Vse llevó a cabo utilizando el cebador de aguas abajo Overlap-A; esta cartilla corre-responde a nt 581 a 605 del gen H5N1. Se realizó PCR con los cebadoresM300RT-S y HA300RT-A para amplificar la longitud total de 3VL-ARN. La RT-PCR se realizó en reacciones separadas (dos pasos) utilizando unEppendorf PCR system Autorisierter termociclador (Eppendorf). Para el RTpaso, cada mezcla de reacción (20 l) contenía 4 l de tampón de primera hebra (Invitro-gen), 1 l de desoxinucleósido trifosfato 10 mM, 1 l de RNaseOUT, 1 l deDitiotreitol 0,1 mM, 1 l de imprimación inversa (Overlap-A), 1 l de SuperScript IIItranscriptasa inversa (Invitrogen), 5 l de ARN y agua destilada estéril a 20l. La mezcla de reacción se incubó inicialmente a 55 ° C durante 50 min y luego a70 ° C durante 15 min. Una alícuota (5 l) del ADNc resultante se amplificó mediante PCR.utilizando una mezcla de 25 l que contenía 1 tampón de PCR (Promega), MgCl 2 1,5 mM ,Trifosfato de desoxinucleósido 300 M, concentraciones de 1,5 M de cada cebador,y 1,25 U de ADN polimerasa Taq (Promega). Después de una incubación inicial en95 ° C durante 3 min, se utilizaron 40 ciclos de las siguientes condiciones de temperatura: 95 ° Cdurante 30 s, 56 ° C durante 30 sy 72 ° C durante 140 s. Una extensión final a 72 ° C durante 10 min.se realizó. Varios controles, incluido un control negativo sin plantilla,un control positivo con ADN de pACYC-3V, y un control negativo consobrenadante de las partículas similares a virus sin RT, se probaron simultáneamente.Los productos de PCR (5 l) se analizaron por electroforesis en geles de agarosa que conteníanbromuro de etidio. HIGO. 1. Sistema de empaquetado blindado de L-RNA. Se construyeron dos vectores de expresión, en los que la maturasa y la proteína de la cubierta fueronexpresado a partir de un plásmido [pET-28 (b)] y el sitio pac y la secuencia de ARN quimérico de seis diana se produjeron a partir del segundo plásmido(pACYCDuet-1). El sitio pac estaba ubicado entre SARS3 y HCV. El L-RNA blindado de 3V se produjo induciendo y expresando elsistema de dos plásmidos.1736WEI ET AL.J. C LIN . M ICROBIOL . Descargado de https://journals.asm.org/journal/jcm el 21 de julio de 2021 en 2001: 67c: 2660: 425: 21b: 21ff: fead: a6c8.
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Para aumentar la sensibilidad de la RT-PCR, se realizó una segunda amplificaciónrealizado en una mezcla de reacción de 25 l que contiene 5l de la amplificaciónproducto en las mismas condiciones de PCR.La identidad de los productos de amplificación se confirmó mediante electrodos en gel de agarosa.troforesis. Las hebras del producto de PCR 3V de longitud completa se clonaron envectores pGEM-T Easy (Promega), y luego los clones AT recombinantes seenviado a Beijing Sunbiotech Co. para ser secuenciado usando cebadores T7 y SP6. LaLas secuencias obtenidas se compararon con las secuencias diana.Para determinar la naturaleza del ARN empaquetado en ARN blindado de 3V,La RT del ARN se llevó a cabo con tres cebadores aguas abajo: Overlap-A,HCV-LAP1 y A-SARS3. La PCR se realizó con los cebadores S-SARS1 yHA300RT-A para amplificar la longitud completa del ARN de 3V y con elpares de cebadores S-SARS1 y HCV-LAP1, S-SARS1 y A-SARS3, y S-SARS1y A-SARS2 para amplificar el SARS-CoV1SARS-CoV2SARS-CoV3HCVsecuencia, la secuencia SARS-CoV1SARS-CoV2SARS-CoV3, y laSecuencia SARS-CoV1SARS-CoV2, respectivamente.Estabilidad del L-RNA blindado de 3V. El L-ARN blindado fue examinado paraestabilidad en suero de ternero recién nacido. Inicialmente, la preparación de L-RNA blindada de 3V purificadaLa aración se cuantificó, por duplicado, con una fluorescencia de PCR de ARN del VHCkit de diagnóstico cuantitativo (Shanghai Kehua Bio-Engineering Co., Ltd.). LaL-RNA blindado cuantificado de 3V se diluyó en serie 10 veces con el ternero recién nacidosuero para obtener 10.000 y 1.000.000 copias / ml. Para cada estudio de estabilidad, un soloEl lote se separó en alícuotas en muestras puntuales individuales de 100 l. LaA continuación, las muestras se incubaron a 4 ° C, 37 ° C o temperatura ambiente. Blindado 3VLas muestras de plasma de L-RNA se extrajeron en cada momento y se almacenaron en80 ° C hasta la finalización del experimento. Todas las muestras se cuantificaron utilizandoun equipo de diagnóstico cuantitativo de fluorescencia de RT-PCR de ARN del VHC (ShanghaiKehua) y termociclador LightCycler (Roche). Luego, los datos fueron analizados porutilizando el software LightCycler (Roche).Calibración del ARN blindado quimérico frente a un estándar internacionalpara el ARN del VHC. Inicialmente, la preparación de L-RNA blindado de 3V purificado setificado, por duplicado, utilizando un diagnóstico cuantitativo de fluorescencia de PCR de ARN del VHCkit (Shanghai Kehua). El L-RNA blindado cuantificado de 3V se diluyó conSe prepararon suero de ternero recién nacido y alícuotas de 500 l mediante dilución en serie de 10 vecespara obtener muestras que contengan 10 6 a 10 2 copias / ml.Para calibrar el ARN blindado quimérico, la Referencia Nacionalmaterial para el ARN del VHC (GBW09151, 2.2610 3 UI ml 1 a 4,2210 7 UI ml 1 )se utilizó; Estos valores de ARN se asignaron utilizando la OMS HCV International.Estándar (NIBSC 96/790). Este material es el gen del VHC de tipo I. La referenciamaterial se volvió a disolver en 300 l de pirocarbonato de dietilo-H 2 O cuando se utiliza.Se utilizaron tres kits de reactivos diferentes disponibles comercialmente para la calibración.ción. El kit de diagnóstico cuantitativo de fluorescencia por PCR de ARN del VHC (ShanghaiKehua) se utilizó para las pruebas de ARN del VHC, las pruebas de PCR del ARN del virus del SARSEl kit de diagnóstico cuantitativo cence (Shenzhen PG Bio-Technology Co., Ltd.) fueutilizado para las pruebas de ARN del SARS-Cov2, y las ffuores de PCR del ARN del virus AIV-H5Se utilizó el kit de diagnóstico cuantitativo cence (Shenzhen PG) para el ARN HA300pruebas. Las pruebas se llevaron a cabo utilizando un termociclador LightCycler (Roche).Primero, usamos un estándar internacional para calibrar el ARN blindado quimérico.Aislamos el ARN molde del estándar internacional y el diluidoARN blindado quimérico. Se utilizó suero de ternero recién nacido como control negativo. TodasLas plantillas de ARN se analizaron en una única ejecución utilizando los ffuores de PCR de ARN del VHC:kit de diagnóstico cuantitativo cence. Luego usamos el blindado quimérico calibradoARN para preparar calibradores de RT-PCR en tiempo real SARS-CoV2 y HA300Ensayos. Las muestras se analizaron en tres réplicas en un volumen final de 25 l que contenía12,5 l de ARN extraído y 12,5 l de la mezcla maestra suministrada con elrespectivos kits. Las condiciones de ciclo térmico utilizadas para los tres kits diferentes.se dan en la Tabla 2. RESULTADOSHomogeneidad del L-RNA blindado. Se aisló ARN departículas de L-RNA blindadas purificadas. La mayoría de los 3VEl L-RNA empaquetado tenía aproximadamente 2200 bases de longitud, comodetectado por tinción con bromuro de etidio (Fig. 2).Análisis de gradiente de densidad de ARN blindados y blindadosPartículas de L-ARN. ARN blindado y L-RNA blindado parti-cles forman bandas estrechas a 1,37 y 1,36 g ml 1 , respectivamente,cuando sedimentan a su densidad de flotación en densidad de CsClgradientes. Esto se compara favorablemente con el anteriorvalor portado de 1,35 g ml 1 (15). HIGO. 2. Caracterización del ARN recombinante empaquetado enL-RNA blindado. Se aisló ARN recombinante de 3V blindadosL-RNA, fraccionado en gel desnaturalizante de agarosa al 3%, teñido conbromuro de etidio y se detecta mediante fluorescencia UV. Abrevi-aciones: M, marcador de ARN; ARN recombinante de L-RNA blindado de 3V, 3V.TABLA 2. Condiciones del ciclo térmico para los tres kits diferentesutilizado en ensayos de RT-PCR en tiempo real ProgramaNo.deciclosTemperatura(° C)Incubaciónhora(min: s)TemperaturatransiciónVelocidad(° C / s)Adquisiciónmodo VHC115025:0020Ninguno21942:0020Ninguno35933:0020Ninguno5515:002Ninguno7215:0020Ninguno442933:0020Ninguno6045:0020Único514030:0020NingunoH5N1114230:0020Ninguno21923:0020Ninguno359210:0020Ninguno4530:0020Ninguno721:0020Ninguno4409210:0020Ninguno6030:0020Único51400:0020NingunoSARS-CoV-2114230:0020Ninguno21923:0020Ninguno359210:0020Ninguno5220:002Ninguno7230:0020Ninguno40925:0020Ninguno46030:0020Único514010:0020NingunoV OL . 46 de 2008ARN QUIMÉRICO LARGO ARMADO L-ARN1737 Descargado de https://journals.asm.org/journal/jcm el 21 de julio de 2021 en 2001: 67c: 2660: 425: 21b: 21ff: fead: a6c8.
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Clonación y secuenciación de los productos de RT-PCR. El tamañode los productos de amplificación por RT-PCR del ARN extraídode L-RNA blindado de 3V era de longitud completa (2248 pb), mientras queel tamaño del ARN extraído del ARN blindado de 3V seentre 1000 y 2000 pb (figura 3). El resultado de la secuenciación demuestrademostró que el tamaño era de 1.200 pb.Durabilidad del L-RNA blindado. El L-RNA blindado fuecompletamente resistente al tratamiento con DNasa y RNasa bajocondiciones en las que tanto el ADN desnudo como el ARN se degradanrápidamente (datos no mostrados).Estabilidad del plasma L-RNA blindado. El L-RNA blindado de 3Ven suero de ternero recién nacido incubado a 4, 37 y 25 ° C fue establemás de 2 meses (Fig. 4).Calibración del ARN blindado quimérico. Para evaluarue el L-RNA blindado de 3V como calibrador para múltiples virus.ensayos, utilizamos el ARN del VHC de referencia nacional asignadoel Estándar Internacional HCV (NIBSC 96/790) para calibrarel L-RNA blindado quimérico diluido en serie. La concentra-ciones del L-RNA blindado quimérico para las cinco muestras (10 6 ,10 5 , 10 4 , 10 3 y 10 2 ) fueron 1.35410 7 UI ml 1 , 5,740 10 5UI ml 1 , 6.58010 4 UI ml 1 , 5,42810 3 UI ml 1 , y9.61310 2 UI ml 1 , respectivamente (Fig. 5).DISCUSIÓNEl L-ARN blindado (2248 pb) expresado por nuestros dos plás-El sistema de coexpresión media difiere en varios aspectos delpartículas similares a virus descritas previamente por Pickett y Pea-cuerpo (17). Estos autores también utilizaron una expresión de dos plásmidossistema; su objetivo era determinar si la Operación 21-nttor (sitio pac) conferiría empaquetabilidad específica de MS2 enARN de bacteriófago in vivo. La E. coli fue inducida de tal manera queEl ARN híbrido Operator- lacZ se coexpresó con el MS2proteína de la cubierta. La especificidad de las bases de Pickett y PeabodyEl sistema de empaquetado de teriófagos, sin embargo, era deficiente ya que el anfitriónEl ARN de E. coli se empaquetó con preferencia al operador- lacZARN. En otros estudios, Pickett y Peabody modificaron elempaquetado del Operator- lacZ RNA cambiando las proporciones deproteína de la cubierta al ARN de Operator- lacZ producido en E. coli . Poraumentando la concentración de Operator- lacZ RNA ydisminuyendo la concentración de la proteína de la cubierta, estos reducenlos buscadores pudieron encapsular principalmente el operador- lacZARN. Estos resultados sugieren que el Pickett y Pea-La estrategia de empaquetado corporal carecía de especificidad porque eranincapaz de determinar una proporción adecuada de proteína de cubierta aOperador- lacZ RNA. Además, el tamaño del ARN lacZ HIGO. 3. Gel de agarosa al 1% teñido con bromuro de etidio de RT-PCR am-productos de plificación de ARN extraído de L-ARN blindado de 3V yARN blindado de 3V. (A) Productos de amplificación por RT-PCR de ARN ex-extraído de L-RNA blindado de 3V. Carril 1, control negativo sinplantilla; carriles 2 y 3, control negativo sin RT; carriles 4 y 5,control positivo del plásmido pACYC-3V; carriles 6 a 8, RT-PCR de 3VL-RNA de longitud completa. (B) Productos de amplificación por RT-PCR de ARN ex-traído de ARN blindado de 3V: carril 1, control positivo de pET-Plásmido MS2-3V que utiliza los cebadores S-SARS1 y HA300RT-A; carril 2,RT-PCR de SARS-CoV1 más SARS-CoV2 más SARS-CoV3 másHCVHA300 utilizando los cebadores S-SARS1 y HA300RT-A; carril 3,control positivo del plásmido pET-MS2-3V utilizando los cebadores S-SARS1y HCV-LAP1; carril 4, RT-PCR de SARS-CoV1 más SARS-CoV2más SARS-CoV3 más HCV usando los cebadores S-SARS1 y HCV-LAP1; carril 5, control positivo del plásmido pET-MS2-3V utilizando elcebadores S-SARS1 y A-SARS3; carril 6, control negativo sin RTutilizando cebadores S-SARS1 y A-SARS3; carril 7, RT-PCR de SARS-CoV1 más SARS-CoV2 más SARS-CoV3 usando los cebadores S-SARS1y A-SARS3; carril 8, RT-PCR de SARS-CoV1 más SARS-CoV2utilizando los cebadores S-SARS1 y A-SARS2; carril 9, control positivo deplásmido pET-MS2-3V usando los cebadores S-SARS1 y A-SARS2; carril10, control negativo sin transcripción inversa utilizando los cebadoresS-SARS1 y A-SARS2.HIGO. 4. Estudio de estabilidad de L-RNA blindado de 3V. L-RNA blindado de 3Vse añadió al suero de ternero recién nacido hasta una concentración final de 10.000 y10,000,000 copias / ml. Las muestras se incubaron a 4 ° C, 37 ° C o en una habitacióntemperatura durante 0, 1, 2, 4 y 8 semanas. Se extrajeron muestras en cadapunto de tiempo y se almacenaron en80 ° C hasta la finalización de laexperimentar. A partir de estos materiales, aislamos la plantilla de ARN para real-ensayos de tiempo de RT-PCR. Se utilizó agua como control negativo. Todo el ARNLas plantillas se analizaron en una única ejecución utilizando una PCR de ARN del VHCkit de diagnóstico cuantitativo de fluorescencia (Shanghai Kehua Bio-Engi-neering Co., Ltd.). La RT-PCR en tiempo real se llevó a cabo utilizando Light-Tecnología cicladora (Roche). La media de las muestras con pocas copias fue de 67.226UI / ml (4,83 log 10 ; rango, 50,100 a 79,400 UI / ml [rango, 4,70 a 4,92log 10 ]), y el coeficiente de variación fue del 12,9%. La media paramuestras de alto número de copias fue 29,060,000 UI / ml (7.45 log 10 ; rango, 22,900,000a 41,700,000 UI / ml [rango, 7.36 a 7.62 log 10 ]), y el coeficiente dela variación fue del 22%.1738WEI ET AL.J. C LIN . M ICROBIOL . Descargado de https://journals.asm.org/journal/jcm el 21 de julio de 2021 en 2001: 67c: 2660: 425: 21b: 21ff: fead: a6c8.
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purificado de estas partículas similares a virus fue de aproximadamente 500bases en contraposición a las 3.000 bases completas esperadas. EstasSin embargo, los autores no pudieron determinar si el gradola radación se produjo antes o después de la encapsulación. En su segundoEn un conjunto de estudios de empaquetamiento, no se evaluó el tamaño del ARNpor electroforesis en gel. La secuencia del bacteriófago MS2 delEl ARN de las partículas de Pickett y Peabody consistía solo enla secuencia de la proteina de la cubierta en un plásmido recombinante, quetrastos con las secuencias de proteína de cubierta y maturasas de MS2 utilizadasen nuestro método. La proteína maturasa es un componente importantenent de ARN blindado. Su presencia en las partículas similares a virus esnecesarios para preservar la integridad del ARN genómico contraDigestión de RNasa (1, 7). Además, un sitio de unión potencial paraLa proteína de la cubierta se ha identificado en la secuencia de madurasas de MS2.sobre la base de la homologa estructural con la operacin de traslacinator (18). La proteína maturasa interactúa específicamente con virus.ARN en dos sitios (23) y, por lo tanto, puede desempeñar un papel facilitadoren embalaje. Pasloske y col. (16) utilizaron una sola expresión de plásmidosion sistema para producir ARN blindado. El ARN blindadocontenía aproximadamente 1,7 kb de secuencia de ARN de bacteriófagosecuencia que codifica la maturasa, la proteina de la cubierta y el pacsitio. Dado que el genoma del ARN del bacteriófago MS2 es aproximadamentemadamente 3,6 kb, es probable que el tamaño máximo del ARN dianaempaquetado tendrá aproximadamente 2,0 kb en ARN blindado; cómo-Nunca, hasta la fecha, no ha habido informes de ARN blindado demás de 1200 pb utilizando el método propuesto por Pasloskeet al.Para llegar a una proporción adecuada de proteína de cubierta ala secuencia quimérica de seis objetivos, seleccionamos el pET28b yPlásmidos pACYCDuet-1 como vectores de expresión. Estos dos plás-mids son miembros de diferentes grupos de compatibilidad. Por lo tanto,Se pueden mantener juntos de forma estable en la misma bacteria.anfitrión. Estos plásmidos contienen el mismo pro-moter, y ambos son plásmidos de copia baja, que tienen casinúmeros de copia equivalentes. Dada esta equivalencia, la razón deproteína de la cubierta de pET28b al ARN quimérico de seis objetivosLa secuencia de pACYCDuet-1 debe ser apropiada.En comparación con el ARN blindado de aproximadamente 1200 pb ob-sostenido utilizando la tecnología blindada original, nuestro trabajo indicaindica que las secuencias de ARN de fragmentos largos (2248 pb) puedenencapsulado mediante el método de coexpresión de dos plásmidos enen conjunción con la variante C del tallo-bucle de tipo salvaje. LaLas partículas blindadas de L-RNA tienen todas las características deARN blindado. La tecnología permite al usuario realizar con precisióndefinir la secuencia del ARN de control. El L-RNA blindadoque comprende una secuencia de ARN extraño de 2248 nt, que incluyetres fragmentos de SARS-CoV, un fragmento de HCV y dosFragmentos de H5N1, se pueden utilizar como control o calibrador paraDeterminación cualitativa o cuantitativa de SARS-CoV, HCV y H5N1tección por RT-PCR. La inclusión del HCV 5UTR hizo quefácil de asignar un valor internacional (UI) al SARS-CoVy ARN H5N1 dentro del L-ARN blindado y evitóprocedimientos complejos involucrados en la asignación de valor de calibracionesnormativas o normas en situaciones en las que sus normas internacionalesdard (IS) no están disponibles (20, 21). Además, el metrólogotrazabilidad ical de la medición de ácido nucleico de todo el ARNLos virus sin IS podrían resolverse mediante el mismo modelo queL-RNA blindado meric.En la Fig.5, se puede ver que el mayor número de copias deEl L-RNA blindado quimérico utilizado fue calibrado más alto que el ex-esperado y no estaba cerca de una correlación 1: 1, un hallazgo que podría serexplicado de la siguiente manera. Primero, un error en el primer paso de dilución.podría haber ocurrido. En segundo lugar, era aceptable que la detecciónLa desviación de las muestras estaba en el rango del valor objetivo.0,27 log 10 (14).En teoría, la longitud del L-RNA blindado expresada por elEl sistema de dos plásmidos podría ser de aproximadamente 3,6 kb HIGO. 5. Calibración del ensayo de RT-PCR en tiempo real para el VHC,SARS-CoV2 y HA300 (H5N1). Primero, el blindado de 3V cuantificadoL-RNA se diluyó con suero de ternero recién nacido 10 veces en serie para obtener100, 1.000, 10.000, 100.000 y 1.000.000 copias / ml. Usamos elMaterial de referencia nacional para el ARN del VHC (GBW09151, 2.2610 3UI ml 1 a 4,2210 7 UI ml 1 ) para calibrar las diluciones seriadas deL-RNA blindado quimérico y luego utilizó el L-RNA calibrado paraPrepare calibradores para los dos ensayos de RT-PCR en tiempo real. A partir de estosmateriales, aislamos la plantilla de ARN para ensayos de RT-PCR. Recién nacidoSe utilizó suero de ternera como control negativo. RT-PCR en tiempo real fuerealizado en un termociclador LightCycler (Roche). (A) Concen-tración del estándar internacional para el ARN del VHC frente al ciclonúmero para la RT-PCR del VHC; (B) curva de amplificación para el VHCEnsayo de RT-PCR; (C) curva de amplificación para el SARS-CoV2 RT-PCRensayo; (D) curva de amplificación para el ensayo de RT-PCR HA300 (H5N1).V OL . 46 de 2008ARN QUIMÉRICO LARGO ARMADO L-ARN1739 Descargado de https://journals.asm.org/journal/jcm el 21 de julio de 2021 en 2001: 67c: 2660: 425: 21b: 21ff: fead: a6c8.
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dado que el genoma del ARN del bacteriófago MS2 es de 3569 pb enlargo. Los resultados presentados aquí indican que al menos unaEl L-ARN blindado de 2248 pb se puede expresar con alta eficiencia.eficiencia. También hemos expresado con éxito una aproximaciónARN blindado quimérico de 2700 pb por el sistema de dos plásmidos(datos no mostrados) y la construcción de un vector de expresiónpara un L-RNA blindado quimérico de más de 3000 pb de longitudestá en marcha.Porque el sitio pac es un punto clave en la interacción entrela proteína de la cubierta MS2 y el ARN exógeno, se cree quela eficiencia de expresión y la capacidad del paquete podrían ser másmejorado si el número de sitios pac se incrementara dentro deel ARN quimérico.En conclusión, los resultados presentados aquí demuestran queel sistema de expresión de dos plásmidos para L-RNA blindado(2000 pb) es efectivo. El L-RNA blindado quimérico, queexhibe propiedades de estabilidad y resistencia a la ARNasa similares aARN blindado, se puede utilizar como calibrador en SARS-CoV,Ensayos de RT-PCR para H5N1 y HCV. EXPRESIONES DE GRATITUDEste estudio fue apoyado en parte por el proyecto SEPSDA delComisión Europea (con el número Sp22-CT-2004-003831), la Na-Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (30371365 y 30571776),y la Capital Medicine Development Foundation de Beijing (2002-3041). REFERENCIAS1. Argetsinger, J. y G. Gussin. 1966. Ácido ribonucleico intacto de defectuosopartículas de bacteriófago R17. J. Mol. Biol. 21: 421–424.2. Beld, M., R. Minnaar, J. Weel, C. Sol, M. Damen, H. van der Avoort, P.Wertheim-van Dillen, A. van Breda y R. Boom. 2004. Muy sensibleensayo para la detección de enterovirus en muestras clínicas mediante transcripción inversación-PCR con un control interno de ARN blindado. J. Clin. Microbiol. 42:3059–3064.3. Bressler, AM y FS Nolte. 2004. Evaluación preclínica de dos, en tiempo real,ensayos de PCR de transcripción inversa para la detección de la respiración aguda gravecoronavirus síndrome tory. J. Clin. Microbiol. 42: 987–991.4. Das, A., E. Spackman, D. Senne, J. Pedersen y DL Suarez. 2006.Desarrollo de un control positivo interno para el diagnóstico rápido de aves.infecciones por el virus de la influenza por transcripción inversa en tiempo real-PCR con liofilizaciónreactivos ilizados. J. Clin. Microbiol. 44: 3065–3073.5. Donia, D., M. Divizia y A. Pana. 2005. Uso de ARN blindado como estándarpara construir una curva de calibración para RT-PCR en tiempo real. J. Virol. Métodos126: 157-163.6. Eisler, DL, A. McNabb, DR Jorgensen y JL Isaac-Renton. 2004. Usode un control positivo interno en una PCR de transcripción inversa multiplex paradetectar el ARN del virus del Nilo Occidental en grupos de mosquitos. J. Clin. Microbiol. 42: 841–843.7. Heisenberg, M. 1966. Formación de partículas de bacteriófagos defectuosos por frmutantes ámbar. J. Mol. Biol. 17: 136-144.8. Hietala, SK y BM Crossley. 2006. ARN blindado como sustituto de virusen un panel de competencia del ensayo de PCR con transcriptasa inversa en tiempo real. J. Clin.Microbiol. 44: 67–70.9. Horn, WT, MA Convery, Nueva Jersey Stonehouse, CJ Adams, L. Liljas, SEPhillips y PG Stockley. 2004. La estructura cristalina de alta afinidadARN tallo-bucle complejado con la cápside del bacteriófago MS2: másdesafíos en el modelado de interacciones ligando-ARN. ARN 10: 1776-1782.10. Horton, RM, HD Hunt, SN Ho, JK Pullen y LR Pease. 1989.Ingeniería de genes híbridos sin el uso de enzimas de restricción: empalme de genesing por extensión de superposición. Gene 77: 61–68.11. Huang, Q., Y. Cheng, Q. Guo y Q. Li. 2006. Preparación de un quiméricoARN blindado como calibrador versátil para ensayos de múltiples virus. Clin. Chem.52: 1446-1448.12. Konnick, EQ, SM Williams, ER Ashwood y DR Hillyard. 2005.Evaluación del analito específico TaqMan del virus de la hepatitis C COBAS (VHC)ensayo de reactivo y comparación con el COBAS Amplicor HCV Monitor V2.0y ensayos Versant HCV bDNA 3.0. J. Clin. Microbiol. 43: 2133-2140.13. Lowary, PT y OC Uhlenbeck. 1987. Una mutación de ARN que aumentala afinidad de una interacción ARN-proteína. Ácidos nucleicos Res. 15: 10483–10493.14. Oliver, AR, SF Pereira y DA Clark. 2007. Evaluación comparativadel inmunodeno humano cuantitativo en tiempo real automatizado Roche TaqManensayo de PCR de ARN del virus de la cepa tipo 1 y Roche AMPLICOR versión 1.5ensayo de PCR convencional. J. Clin. Microbiol. 45: 3616–3619.15. Pasloske, BL, CR Walkerpeach, RD Obermoeller, M. Winkler yDB DuBois. 1998. Tecnología de ARN blindado para la producción de ribonucleótidos.controles y estándares de ARN viral resistente a asas. J. Clin. Microbiol. 36: 3590–3594.16. Pasloske, BL, D. DuBois, D. Brown y M. Winkler. Abril de 2001. Ribo-preparación y utilización de ARN resistente a nucleasas. Patente de Estados Unidos 6.214.982.17. Pickett, GG y DS Peabody. 1993. Encapsidación de heterólogosARN de la proteína de la cubierta del bacteriófago MS2. Ácidos nucleicos Res. 21: 4621–4626.18. Romaniuk, PJ, P. Lowary, HN Wu, G. Stormo y OC Uhlenbeck.1987. Sitio de unión de ARN de la proteína de cubierta R17. Biochemistry 26: 1563-1568.19. Rowsell, S., Nueva Jersey Stonehouse, MA Convery, CJ Adams, AD Ellington,I. Hirao, DS Peabody, PG Stockley y SE Phillips. 1998. Crystalestructuras de una serie de aptámeros de ARN complejados con la misma proteínaobjetivo. Nat. Struct. Biol. 5: 970–975.20. Saldanha, J. y A. Heath. 2003. Estudio colaborativo para calibrar la hepatitisGenotipos del virus C 2-6 contra el Estándar Internacional del VHC, 96/790 (ge-notype 1). Vox Sang 84: 20-27.21. Saldanha, J., A. Heath, C. Aberham, J. Albrecht, G. Gentili, M. Gessner yG. Pisani. 2005. Estudio colaborativo de la Organización Mundial de la Salud para establecerun estándar internacional de reemplazo de la OMS para el ARN del virus de la hepatitisEnsayos de tecnología de amplificación de ácido cleico. Vox Sang 88: 202-204.22. Scheuermann, RH y H. Echols. 1984. Una exonucleasa de edición separadapara la replicación del ADN: la subunidad épsilon del polímero de ADN de Escherichia coli-ase III holoenzima. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 7747–7751.23. Shiba, T. e Y. Suzuki. 1981. Localización de la proteína A en el ARN-A.complejo proteico del fago de ARN MS2. Biochim. Biophys. Acta 654: 249-255.24. Stockley, PG, Nueva Jersey Stonehouse, C. Walton, DA Walters, G. Medina, JMMacedo, HR Hill, ST Goodman, SJ Talbot y HK Tewary. 1993.Mecanismo molecular de la morfogénesis del fago-ARN. Biochem. Soc. Trans.21: 627–633.25. Stockley, PG, NJ Stonehouse y K. Valegard. 1994. Molecular mech-anismo de la morfogénesis del fago de ARN. En t. J. Biochem. 26: 1249-1260.26. Talbot, SJ, S. Goodman, SR Bates, CW Fishwick y PG Stockley.1990. Uso de oligoribonucleótidos sintéticos para probar la interacción ARN-proteínaciones en el complejo de operador traslacional MS2. Ácidos nucleicos Res. 18:3521–3528.27. Valegard, K., JB Murray, Nueva Jersey Stonehouse, S. van den Worm, PGStockley y L. Liljas. 1997. Las estructuras tridimensionales de dos componentesplexos entre cápsides de MS2 recombinantes y fragmentos de operadores de ARNrevelan interacciones proteína-ARN específicas de secuencia. J. Mol. Biol. 270: 724–738.28. WalkerPeach, CR, M. Winkler, DB DuBois y BL Pasloske. 1999.Controles de ARN resistentes a ribonucleasas (ARN blindado) para transcripción inversaanálisis de PCR, ADN ramificado y genotipado para el virus de la hepatitis C. Clin.Chem. 45: 2079–2085.29. Witherell, GW, JM Gott y OC Uhlenbeck. 1991. Interacción específicaentre las proteínas de la cubierta del fago de ARN y el ARN. Prog. Res. De ácido nucleico Mol.Biol. 40: 185–220. 1740WEI ET AL.J. C LIN . M ICROBIOL . Descargado de https://journals.asm.org/journal/jcm el 21 de julio de 2021 en 2001: 67c: 2660: 425: 21b: 21ff: fead: a6c8.
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RNase-Resistant Virus-Like Particles Containing Long Chimeric RNA
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DE ESTO NO SE PUEDE DECIR QUE ES FAKE NEWS... ¡PUES ES un DOCUMENTO OFICIAL de AQUÍ!
Que Dios les bendiga a todos
Paz a la gente de buena voluntad
Pienso que existe la evidencia suficiente... De todas maneras, creo que quien no quiera creer, va a seguir no creyendo nada... (aunque lo peor es ser mentir oso).
A nuestros "queridos verificadores" del foro... Ellos más bien tienen mucha faena por delante...
De tratar de desmentir algo que no puede serlo!
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Saludos OSO, justo ahora hay un problema en el sureste de México porque muchas personas no quieren vacunarse, como sabes no todos los mexicanos tienen acceso a la internet, en muchas partes ni siquiera hay cobertura, entonces podrás imaginar que las personas que viven en estos lugares no tienen acceso a tales publicaciones, entonces digamos que ahí existe un "problema" porque hay un sector de la población que no quiere vacunarse y no pueden obligarlos a que se vacunen, entonces según se han planteado las cosas ese grupo que continua sin vacunarse no ayuda a aplanar la curva de contagios(o bajar la tasa de letalidad ya no sé que es lo que hace exactamente la vacuna).. bueno ese es más o menos el panorama según se han planteado las cosas en los medios de comunicación: es importante vacunarse para combatir la pandemia. Pienso yo que el gobierno tiene recursos para emprender campañas informativas en esos lugares donde hay personas que ni un televisor tienen, de hecho el gobierno actual de México dice tener finanzas sanas y recursos, si es importante vacunarse ¿por qué no informan a esas personas? sobre todo ¿por qué no hablar claramente? decir cuales son los riesgos y los beneficios y que cada persona con la información "necesaria" tome su propia decisión. Pienso que sería más sencillo persuadir a las personas de que se vacunen si se les da información, si cuentan con los argumentos para informarle a la población que son más los beneficios que los riesgos ¿por qué no lo hacen?
No se si conoce el caso de Andrew Wakefield:
En febrero de 1998, el médico británico Andrew Wakefield vinculó la vacuna conocida como MMR — por las siglas en inglés para el sarampión, las paperas y la rubéola— con los casos de autismo en niños mayores de un año.
Su afirmación estaba motivada por una investigación que firmaban 13 facultativos, entre los que se encontraba él, y que se había publicado en la revista The Lancet.
Al parecer el mejor argumento que tuvieron para desacreditar a Wakefield fue que lo vincularon con una firma de abogados que se ofrecía a presentar litigios contra las empresas farmacéuticas y la comunidad médica:
Casi un año después de la noticia y tras seis años de investigación de Deer, el Consejo General de Medicina de Reino Unido declaró culpable a Walkfield de no haber revelado sus vínculos con esta firma de abogados.
Su nombre fue eliminado del registro oficial de médicos y The Lancet se retractó. https://www.bbc.com/mundo/noticias-43842219
En México, según escuché, hubo un caso parecido con una vacuna que dejo cierto grado de daño renal en personas de una generación de mexicanos que recibió dicha vacuna ¿Qué tanto es verdad? ¿Qué tanto es mentira? ¿Son mayores los beneficios que los riesgos de las vacunas COVID-19? ¿Son altos los riesgos? Como tomar una decisión cuando no se cuenta con información suficiente, pareciera que se centran más esfuerzos en combatir a los anti-vacunas que en informar con argumentos científicos a la población y persuadir a las personas de que se vacunen.
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Son muchos los disparates escritos.
Ayer se estaba examinando una alumna para el acceso a la universidad porque no lo pudo hacer antes por dar positivo. Se contagio en una cafetería con unas amigas que fueron a Mallorca al botellón. Con sus 17 años ha perdido el olfato y no lo ha recuperado. ¿Qué le podéis prometer los antivacuas para recuperar el olfato?
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Salud y bendición en la paz de Cristo.
Por eso TE DECÍA que ellos TIENEN un PROBLEMA ESPIRITUAL... pues SE NIEGAN a RECONOCER la EVIDENCIA de la VERDAD y TOMAN PARTIDO por la INJUSTICIA y la MENTIRA (2 Tesalonicenses 2:8-12)... y ESO YA les DESCALIFICA TOTALMENTE... por lo menos para mí... y por eso LLAMANDO a las COSAS por su NOMBRE... LES CALIFICO con APELATIVOS como los que USO... SOBRE TODO a QUIENES SE LO EXPLIQUÉ y DEMOSTRÉ de MODO IRREFUTABLE... y SE SIGUEN NEGANDO a RECONOCER LO EVIDENTE.
TENGO que REVISAR ESE DOCUMENTO de 2008 de CHINA... y aunque ES MUY TÉCNICO para que la GENTE LO LEA... SÍ CONSIDERO QUE MERECE la PENA TRADUCIRLO... y LO TRADUCIRÉ BIEN... SOBRE TODO ESOS ASPECTOS que DEMUESTRAN que ESTO del SARS-CoV2 (y SARS-CoV3) con el ARN MENSAJERO... NO SON COSAS SURGIDAS AHORA... SINO del 2008... lo que DESCUBRE la CANTIDAD de MENTIRAS que HAN ESTADO CONTANDO para ENGAÑAR a la GENTE... y JUSTIFICAR lo que a TODAS LUCES ES UNA CONSPIRACIÓN PROGRAMADA para ENRIQUECERSE y MATAR a CUANTOS MAS MEJOR... por eso de la DESPOBLACIÓN MUNDIAL que PRETENDEN.
TENGO que REVISAR ESE DOCUMENTO de 2008 de CHINA... y aunque ES MUY TÉCNICO para que la GENTE LO LEA... SÍ CONSIDERO QUE MERECE la PENA TRADUCIRLO... y LO TRADUCIRÉ BIEN... SOBRE TODO ESOS ASPECTOS que DEMUESTRAN que ESTO del SARS-CoV2 (y SARS-CoV3) con el ARN MENSAJERO... NO SON COSAS SURGIDAS AHORA... SINO del 2008... lo que DESCUBRE la CANTIDAD de MENTIRAS que HAN ESTADO CONTANDO para ENGAÑAR a la GENTE... y JUSTIFICAR lo que a TODAS LUCES ES UNA CONSPIRACIÓN PROGRAMADA para ENRIQUECERSE y MATAR a CUANTOS MAS MEJOR... por eso de la DESPOBLACIÓN MUNDIAL que PRETENDEN.
Que Dios les bendiga a todos
Paz a la gente de buena voluntad
Conozco La historia del artículo fraudulento que relacionó las vacunas con el autismo
Y aunque parezca increíble, aquí mismo hay vacunofóbicos que siguen avalando no solo éste sino otros fraudes más.
Y es que en la torcida mente de un negacionista, sucede la negación precisamente como mecanismo de defensa. Así, lo mismo niegan el cambio climático que el hombre haya llegado a la luna, o que la tierra sea redonda o que la vacuna no es la marca de la Bestia, sin embargo, esto para un negacionista es la realidad.
Te invito a que leas los escritos de esa clase de personajes en este mismo epígrafe y que pululan en el foro.
Lee sus fallidos "argumentos", los cuales son menos que creíbles, cuando no, se trata de fake news, historias ridículas que ellos mismos difunden y avalan entre ellos mismos como si fuesen verdades.
Aquí mismo uno de estos siniestros personajes acaba de citar un artículo del que evidentemente no entendió ni papa, pero en su obtusa mente cree que es un "argumento" contra las vacunas!
Saludos.
Última edición:
Ante nada, me parece una desfachatez (como poco) presentarse aquí y no querer admitir ninguna de las DECENAS DE PRUEBAS que existen y que ni pueden refutarse,
Y como habéis caído en el hipocondrismo, y no razonáis ya nada mas que lo que os diga la tele... pues lo único que puedo prometerte... es que si dejas de informarte por los Mass Media tal vez os va mejor!
Resfriado-gripe: pérdida grave del olfato a largo plazo
IntroducciónLas personas afectadas por pérdida olfativa total y de por vida se sitúan
www.elsevier.es
Lo he dicho:
No se si te engañan o te engañas a ti mismo, no se si es porque eres muy inocente o muy idiota. Como he dicho también, siempre me he inclinado más por lo segundo.
Este artículo no tiene anda que ver con ningún peligro de ninguna vacuna, por el contrario, como cita el propio artículo: "el enfoque que usamos para la preparación de L-RNA blindado es práctico y podría reducir la mano de obra y el costo del control de calidad en ensayos de virus de ARN multiplex. Además, podemos asignar al ARN blindado quimérico una unidad internacional para la detección cuantitativa." ARTÍCULO ORIGINAL
¡Bravo genio!
La tecnología para hacer vacunas a través de ARN tienen una experiencia de más de 10 años, así que el mito de que "no son seguras porque se hicieron al vapor", cae por su propio peso
Y esto que dices solo puede salir de la mente de un perturbado mental
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Salud y bendición en la paz de Cristo.
PARECE que NO ENTIENDES lo que DIGO porque NO TIENES COMPRENSIÓN de LECTURA o el DIABLO TE CIEGA para que NO ENTIENDAS lo que TE DICEN... por lo que PARECE que el IDIOTA ERES TÚ... y NO yo (aunque yo me INCLINO MÁS por lo del DIABLO a quien PARECE que HONRAS como PADRE con TODAS tus MENTIRAS que LLEVAN a la GENTE a la MUERTE. Juan 8:44)... ASÍ que REPITO lo que DIJE... a VER SI AHORA ENTIENDES lo que PARA mí ES RELEVANTE y QUIERO RESALTAR de la PRUEBA PRESENTADA por Patrick... a QUIEN LE EXPLICABA LO SIGUIENTE.
"Por eso TE DECÍA que ellos TIENEN un PROBLEMA ESPIRITUAL... pues SE NIEGAN a RECONOCER la EVIDENCIA de la VERDAD y TOMAN PARTIDO por la INJUSTICIA y la MENTIRA (2 Tesalonicenses 2:8-12)... y ESO YA les DESCALIFICA TOTALMENTE... por lo menos para mí... y por eso LLAMANDO a las COSAS por su NOMBRE... LES CALIFICO con APELATIVOS como los que USO... SOBRE TODO a QUIENES SE LO EXPLIQUÉ y DEMOSTRÉ de MODO IRREFUTABLE... y SE SIGUEN NEGANDO a RECONOCER LO EVIDENTE.
TENGO que REVISAR ESE DOCUMENTO de 2008 de CHINA... y aunque ES MUY TÉCNICO para que la GENTE LO LEA... SÍ CONSIDERO QUE MERECE la PENA TRADUCIRLO... y LO TRADUCIRÉ BIEN... SOBRE TODO ESOS ASPECTOS que DEMUESTRAN que ESTO del SARS-CoV2 (y SARS-CoV3) con el ARN MENSAJERO... NO SON COSAS SURGIDAS AHORA... SINO del 2008... lo que DESCUBRE la CANTIDAD de MENTIRAS que HAN ESTADO CONTANDO para ENGAÑAR a la GENTE... y JUSTIFICAR lo que a TODAS LUCES ES UNA CONSPIRACIÓN PROGRAMADA para ENRIQUECERSE y MATAR a CUANTOS MAS MEJOR... por eso de la DESPOBLACIÓN MUNDIAL que PRETENDEN."
"Por eso TE DECÍA que ellos TIENEN un PROBLEMA ESPIRITUAL... pues SE NIEGAN a RECONOCER la EVIDENCIA de la VERDAD y TOMAN PARTIDO por la INJUSTICIA y la MENTIRA (2 Tesalonicenses 2:8-12)... y ESO YA les DESCALIFICA TOTALMENTE... por lo menos para mí... y por eso LLAMANDO a las COSAS por su NOMBRE... LES CALIFICO con APELATIVOS como los que USO... SOBRE TODO a QUIENES SE LO EXPLIQUÉ y DEMOSTRÉ de MODO IRREFUTABLE... y SE SIGUEN NEGANDO a RECONOCER LO EVIDENTE.
TENGO que REVISAR ESE DOCUMENTO de 2008 de CHINA... y aunque ES MUY TÉCNICO para que la GENTE LO LEA... SÍ CONSIDERO QUE MERECE la PENA TRADUCIRLO... y LO TRADUCIRÉ BIEN... SOBRE TODO ESOS ASPECTOS que DEMUESTRAN que ESTO del SARS-CoV2 (y SARS-CoV3) con el ARN MENSAJERO... NO SON COSAS SURGIDAS AHORA... SINO del 2008... lo que DESCUBRE la CANTIDAD de MENTIRAS que HAN ESTADO CONTANDO para ENGAÑAR a la GENTE... y JUSTIFICAR lo que a TODAS LUCES ES UNA CONSPIRACIÓN PROGRAMADA para ENRIQUECERSE y MATAR a CUANTOS MAS MEJOR... por eso de la DESPOBLACIÓN MUNDIAL que PRETENDEN."
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¡YA... y lo del SARS-CoV2 y SARS-CoV3... TAMBIÉN EXISTEN HACE MÁS de 10 AÑOS... pero NOS DICEN que el SARS-CoV2 ES un VIRUS NUEVO... y el SARS-CoV3 TODAVÍA NO LO HAN SACADO a PASEAR! ¿QUÉ CREES... QUE NO SÉ que el ARN MENSAJERO SE CONOCE de HACE MUCHOS AÑOS y TAMBIÉN LO PELIGROSO que PUEDE RESULTAR?
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es.commonsensetv.nl
El propio inventor de las vacunas para covid advierte de los peligros de esta inyección experimental
El Dr. Robert Malone, inventor de la tecnología de ARNm y ADN para las vacunas, está preocupado por la falta de transparencia sobre los efectos secundarios, la censura de la discusión y la falta del consentimiento infor
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Los secretos de las vacunas ARNm experimentales.
No kakunes a tus hijos... ni se te ocurra; no les expongas a un experimento genético del cual se desconocen las consecuencias que traerá; lo que sí se sabe es que ya han muerto decenas de miles por la kakunación masiva
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¡El inventor del ARNm activa la ALARMA! Esto es lo que le hace la vacuna y ¡DEBE saberlo!
Dr. Robert W. Malone es el inventor de la tecnología de vacunas de ARNm y recientemente se unió a Brett Brownstein, Ph.D. para un episodio de Dark Horse Podcast. Malone expresó su preocupación por los hallazgos de la investigación a la que hace referencia Bridle.
es.commonsensetv.nl
Críticas a las vacunas de ARNm de COVID-19
En un panel de discusión organizado por el biólogo Bret Weinstein el 11 de junio de 2021, el Dr. Malone advierte sobre el uso de la vacunación basada en ARNm en el curso de la pandemia de COVID 2020-21.7 Afirma haber informado a la agencia estadounidense FDA sobre los incalculables riesgos y efectos secundarios de estas terapias génicas y haberlos advertido desde el principio. La entrevista es controvertida en la comunidad científica por declaraciones imprecisas. Como resultado, la Agencia Internacional de Noticias Reuters y el sitio web de verificación de datos Politifact han emitido una advertencia de noticias falsas.8
LO CURIOSO ES que la COMUNIDAD CIENTÍFICA NO LO TENGA CLARO... CUANDO el DR. Robert W. Malone HIZO una AFIRMACIÓN POSITIVA... RESPALDÁNDOLO con DOCUMENTOS CLÍNICOS que ENVÍO a la FDA... lo que DEMUESTRA que la FDA de EE.UU. ESTÁ CONSPIRANDO con TODOS ESTOS GLOBALISTAS del ANTICRISTO.
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¡YA... y lo del SARS-CoV2 y SARS-CoV3... TAMBIÉN EXISTEN HACE MÁS de 10 AÑOS... pero NOS DICEN que el SARS-CoV2 ES un VIRUS NUEVO... y el SARS-CoV3 TODAVÍA NO LO HAN SACADO a PASEAR! ¿QUÉ CREES... QUE NO SÉ que el ARN MENSAJERO SE CONOCE de HACE MUCHOS AÑOS y TAMBIÉN LO PELIGROSO que PUEDE RESULTAR?
El propio inventor de las vacunas para covid advierte de los peligros de esta inyección experimental
El Dr. Robert Malone, inventor de la tecnología de ARNm y ADN para las vacunas, está preocupado por la falta de transparencia sobre los efectos secundarios, la censura de la discusión y la falta del consentimiento infor
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No kakunes a tus hijos... ni se te ocurra; no les expongas a un experimento genético del cual se desconocen las consecuencias que traerá; lo que sí se sabe es que ya han muerto decenas de miles por la kakunación masiva
¡El inventor del ARNm activa la ALARMA! Esto es lo que le hace la vacuna y ¡DEBE saberlo!
Dr. Robert W. Malone es el inventor de la tecnología de vacunas de ARNm y recientemente se unió a Brett Brownstein, Ph.D. para un episodio de Dark Horse Podcast. Malone expresó su preocupación por los hallazgos de la investigación a la que hace referencia Bridle.Críticas a las vacunas de ARNm de COVID-19
En un panel de discusión organizado por el biólogo Bret Weinstein el 11 de junio de 2021, el Dr. Malone advierte sobre el uso de la vacunación basada en ARNm en el curso de la pandemia de COVID 2020-21.7 Afirma haber informado a la agencia estadounidense FDA sobre los incalculables riesgos y efectos secundarios de estas terapias génicas y haberlos advertido desde el principio. La entrevista es controvertida en la comunidad científica por declaraciones imprecisas. Como resultado, la Agencia Internacional de Noticias Reuters y el sitio web de verificación de datos Politifact han emitido una advertencia de noticias falsas.8LO CURIOSO ES que la COMUNIDAD CIENTÍFICA NO LO TENGA CLARO... CUANDO el DR. Robert W. Malone HIZO una AFIRMACIÓN POSITIVA... RESPALDÁNDOLO con DOCUMENTOS CLÍNICOS que ENVÍO a la FDA... lo que DEMUESTRA que la FDA de EE.UU. ESTÁ CONSPIRANDO con TODOS ESTOS GLOBALISTAS del ANTICRISTO.Que Dios les bendiga a todos
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Bióloga genetista, de las de verdad
Discurso de una Bióloga Genetista diciendo verdades como puños en Boólogos por la verdad
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Ya entendiste que el artículo que citaste no tiene que ver nada con ningún peligro por las vacunas?
Ya deja de difundir fake news.
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Las graves infecciones por ADE y la toxicidad de la proteína S, los últimos bulos antivacunas
Expertos en coronavirus y el desarrollo de vacunas desmontan estas teorías falsas que circulan por la red sobre los fármacos contra la covid, en LD.
EUROPA PRESSYésica Sánchez Seguir a yesicasc
2021-07-03
La revolución en marcha. Bulos antivacunas
SIN COMPLEJOS
Los bulos relacionados con las vacunas contra la covid son múltiples y variados. Algunos muy fáciles de desmontar, como los que le atribuían superpoderes magnéticos a los que recibían el pinchazo. Otros demasiado peliculeros como para dedicar ni siquiera un segundo de nuestro tiempo a plantearnos su veracidad. Es el caso del que empezó a circular hace unos días por las redes sociales de Bolivia y aseguraba que estos fármacos convierten -literalmente- a sus receptores en hombres lobo que devoran a los humanos.
Los antivacunas, orquestados o no, siempre terminan volviendo a la carga. Y utilizan todo tipos de armas. Difunden teorías o datos totalmente inventados, pero también se sirven de medias verdades. Una táctica bastante más peligrosa porque confeccionan falsedades aparentemente verosímiles. Y suelen ser suficiente para conseguir su objetivo, aunque sea en una pequeña parte de la población: sembrar la duda.
A este grupo pertenecerían dos de los últimos bulos que los grupos contrarios a la vacunación contra la covid han difundido dentro y fuera de nuestras fronteras. Uno asegura que provocan ADE (amplificación de la infección dependiente de anticuerpos). Y el segundo hace referencia a la supuesta toxicidad de la proteína S (Spike), a pesar de que -según los expertos- no hay ninguna prueba de que así sea.
….SEGUIR LEYENDO…
(Y POR ENDE EL CABALLO DE TROYA PARA UNA "VACUNACIÓN MASIVA)
Mucha atención a esta información, porque revela la magnitud del engaño al que se nos está sometiendo: el Sars-Cov-2 y el Sars-Cov-3 (sí, habéis leído bien) aparecen en un estudio publicado en el "Journal of clinical microbiology" ¡en 2008!
¿Qué más pruebas hacen falta para que la gente termine de despertar?
¿Cómo es posible que en 2008 ya tuvieran identificado el SARS-CoV2 e incluso un virus que supuestamente a día de hoy aún no existe cómo es el SARS-CoV3 (que será la siguiente "pandemia" que tienen pensado fabricar), incluidas las secuencias de los cebadores de las pruebas PCR que en teoría sirven para poderlos detectar?
La respuesta es muy sencilla: todo lo que está ocurriendo fue planificado hace mucho tiempo, y ahora estámos asistiendo al desarrollo del guión que los ingenieros sociales crearon para someter a la humanidad.
PD: No hace falta que se molesten en borrar todos los datos de la página -historico y referencias- para decir luego que fue un error informatico, como hicieron con el escándalo del Banco Mundial y su compra de kits diagnósticos del Covid-19 mucho antes de la pandemia; existen capturas del estudio cientifico del 2008, y muchos contrainformadores disponemos de la página original guardada en pdf.
(Fuente: https://www.bitchute.com/; visto en http://pensaresgratis-mafiappsoe.blogspot.com)
Porque el estudio fue escrito en marzo del 2021 no en 2008.
web.archive.org/web/20210309215408/https://jcm.asm.org/content/46/5/1734